視網(wǎng)膜

視網(wǎng)膜是眼球中重要的結(jié)構(gòu)之一，它是位于眼球壁內(nèi)層的一層透明薄膜，周圍布滿了大量的感光細胞和神經(jīng)纖維，通過它可以直接接受來自外界環(huán)境的光線并在眼球內(nèi)形成影像，通過神經(jīng)纖維將影像信息傳送至大腦中樞形成視覺。

其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)也有小膠質(zhì)細胞，在健康的視網(wǎng)膜中，神經(jīng)元和小膠質(zhì)細胞之間的交流對維持神經(jīng)元向大腦發(fā)送信號的能力非常重要。

視網(wǎng)膜血管作為人體內(nèi)可以進行非創(chuàng)傷直接觀察的深層微血管，其生理狀況的檢查對高血壓、糖尿病、動脈硬化等心血管疾病的診斷、治療評價具有重要意義。

一般而言，眼底圖像通常都是通過激光掃描成像進行采集，但是由于眼底可觀測的視野往往是很有限的，一個患者的眼底信息需要多張掃描圖像才能完全顯示出來。這種局限性大大不利于病情進行全面的、細致的診斷。Tissue Cytometry全景組織流式定量分析技術(shù)進行全景圖像獲取，在單細胞、組織結(jié)構(gòu)、細胞空間信息等多個層面進行定位、定性、定量分析。從而更好的對病變區(qū)域進行有針對性的跟蹤觀察和全面分析。

實驗目的

視網(wǎng)膜熒光樣本中小膠質(zhì)細胞胞體、神經(jīng)纖維識別、血管識別、血管斑點識別、神經(jīng)元與血管的距離分析。

實驗流程

1. 利用TissueFAXS系統(tǒng)進行玻片熒光的全景掃描。

2. 使用StrataQuest分析軟件進行定量分析。

3. 根據(jù)FITC通道識別神經(jīng)胞體并篩選出細胞胞體（細胞核識別算法）。

4. 膜識別FITC染色信號的區(qū)域確定神經(jīng)纖維，并對不同長度神經(jīng)纖維進行分類。

5. 識別血管的Texa Red染色區(qū)域面積及強度。

6. 計算神經(jīng)元與血管間的空間距離，并統(tǒng)計數(shù)量和占比。

7. 根據(jù)毛細血管亮斑的識別結(jié)果，統(tǒng)計新生小血管數(shù)量。

實驗過程

單通道灰階圖（↑：FITC，↓：Texa Red）

根據(jù)染色強度，染色面積，細胞形態(tài)學，利用正反向回溯功能和設(shè)門圈選Gating，排除雜質(zhì)，細胞碎片，黏連細胞（綠色框線標記），獲得神經(jīng)元胞體，（粉色框線標記），并將胞體按照面積分為兩類（散點圖）。

由于該視網(wǎng)膜樣本是標記的小膠質(zhì)細胞，根據(jù)面積將神經(jīng)胞體分為兩類（Small bodycell，Big bodycell），反向回溯Big bodycell中的細胞后，應用Input Gate功能篩選短粗的神經(jīng)纖維，作為激活態(tài)的小膠質(zhì)細胞。

激活態(tài)小膠質(zhì)細胞識別

血管識別：根據(jù)Texa Red通道進行識別，并去除面積小的及非同一焦面的血管，僅對確定的清晰的同一焦面的大血管進行面積統(tǒng)計。

血管與小膠質(zhì)細胞的距離

血管與小膠質(zhì)細胞的距離0-0.1μm（紅色框線標記）

血管與小膠質(zhì)細胞的距離0.1-1μm（粉色標記）

血管與小膠質(zhì)細胞的距離1-3μm（粉色標記）

此外，Tissue Cytometry散點圖-熱力圖-數(shù)據(jù)同屏疊加對比功能，可以整合多種數(shù)據(jù)分析的二維圖像，便于研究者們直觀的對比與校驗；同屏對比功能，不但可以同屏預覽，還可以支持多點實時聯(lián)動縮放，便于觀察/分析圖像，打通信息分析時數(shù)據(jù)-圖像之間的屏障。